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Gold逆转录酶

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Gold逆转录酶

Gold逆转录酶是通过基因重组技术改造M-MLV得到的耐热逆转录酶,具有更高的热稳定性,可在 37℃-55℃条件下合成第一链cDNA。
价格: 140.00~600.00
运费 ¥0.00
R3001(2000U) R3002(10000U)

Gold逆转录酶

 

货号/规格R3001/2,000U, R3002/10,000U

 

产品简介

Gold逆转录酶通过基因重组技术改造M-MLV得到的耐热逆转录酶,具有更高的热稳定性,可在 37-55℃条件下合成第一链cDNA。同时该酶去除了RNaseH 活性,对于常见的逆转录反应抑制剂具有较高的耐受度,cDNA合成能力更强,可用于复杂二级结构的RNA逆转录,能够合成较长的cDNA 以及构建高比例的全长cDNA文库等。

 

产品组成

Component

R3001

(2,000U)

R3002

(10,000U)

Gold逆转录酶(200U/μl

10 μl 

50 μl 

5X Gold Buffer

100 μl  

500 μl  

 

活性定义

Poly (rA)·Oligo (dT)为模板/引物,在37℃,10 min条件下,使1 nmoldTTP掺入酸性沉淀物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)

 

保存条件

-30~-15保存。

 

应用举例

第一链cDNA合成

1. 配制反应体系

按以下体系于RNase-free的离心管中配制逆转录反应液: 

Component

Amount

Final Conc.

Oligo (dT)15 Primer (50 µM) [1] 

or Random Primer (100 µM) [1]

or 特异性引物 (2 µM) [1] 

1 μl

2.5 µM 

5 µM 

0.1 µM 

Total RNA [2]

or Poly A+ RNA [2]

10 pg ~ 1 µg

10 pg ~ 100 ng

0.5 pg ~ 50 ng/μl 

0.5 pg ~ 5 ng/μl

5X Gold Buffer

4 μl

1X

dNTP Mix (10 mM each)

1 μl

0.5 mM

Gold 逆转录酶 (200 U/µl)

1 μl

10 U/μl

RNase inhibitor (40 U/µl)

1 μl

2 U/μl

RNase-free ddH2O

to 20 μl

-

[1] 请根据实验需要选择合适的引物:Oligo dT引物仅转录mRNARandom Primer可转录所有类型的RNA特异性引物仅转录特异的RNA片段。当后续实验为qPCR时,建议混合使用Oligo dTRandom Primer1 μl,提高定量结果的准确性。

[2] 若产物后续进行PCR反应,则建议先对模板RNA进行变性处理打开二级结构,有助于提高逆转录产物的产量。配置以下反应体系,于65℃加热5 min,再置于冰上迅速冷却2 min

Component

Amount

Total RNA

or Poly A+ RNA

10 pg ~ 5 μg

10 pg ~ 500 ng

RNase-free ddH2O

to 10 μl  

2. 设定程序进行逆转录反应

将上述混合物充分混匀后按以下条件进行逆转录反应:

Temperature

后续为PCR反应

后续为qPCR反应

Time

25 [1]

5 min

/

37 [2]

45 min

15 min

85

5 sec

5 sec

[1] 当使用Random Primer需要此步,当使用Oligo (dT)15 Primer或特异性引物时无需进行此步。

[2] 当模板RNA具有复杂的二级结构或者高GC含量时,可将温度提高至50℃。

产物可立即进行PCRqPCR反应,或保存于-20℃及以下环境中,并避免反复冻融。

 

注意事项

1. 请使用高质量的RNA,保证逆转录反应的效率

2. 在逆转录反应中注意防止RNase污染

 

本品仅供科学研究使用。


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